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技術文章

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點試驗

閱讀:274發布時間:2015-7-2

實驗方法原理    在葡萄糖-6-磷酸(GbB)和NADP存在下,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)能使用NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下不會發出熒光。
實驗材料    G6P NADPHCl
試劑、試劑盒    氧化型*皂素蒸餾水
實驗步驟    
一、 實驗試劑:混合試劑的與配方:

0.1mol/L    G6P     1ml

7.5mmol/L     NADP  1ml   0.7mol/L    tris-HCl(PH7.8)3ml

8mmol/L       氧化型* 1ml

10g/L皂素2ml

蒸餾水2ml

如混合試劑分裝后-20℃保存,可穩定數月

二、實驗操作:

1. 標本采集:EDTA·Na2H或肝素抗凝全血,若置4℃保存可穩定1周,亦可用肝素化毛細血管從手指或足踉采末梢血液。

2. 取12MM×75MM試管3支,患者.正常(對照)和陽性(對照),血各管加入追合試劑200微升.

3. 向各管分別加入患者正常和陽性的抗凝全血20微升,混合后置25℃室溫中。

4. 在反應0/min(混勻后立即吸出)5min和10min時分別從各管吸出反應液1滴,加于新華1號液紙上,使充分干燥.

5. 在暗室內,用波長200-340nm的紫外線照射濾紙上的斑點,檢查有無熒光.

6. 正常人的0min斑點無熒光,5min和10min斑點出現熒光,10min斑點熒光zui強,G6PD缺陷患者在0min. 5min和10min均無熒光。

三、 實驗結果:正常人有甚強的熒光,G6PD缺陷患者熒光很弱或無熒光,雜合于或某些G6PD變異體者則可能有輕度到中度熒光.
收起 
注意事項    
1. 本法是直接測定;NADPH的量特異性較好.

2. 每次或每批要有G6PD正常和缺陷者的標本作對照.


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