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上海酶聯生物研究所

雌二醇Elisa試劑盒的原理及操作步驟

時間:2019-5-21閱讀:998
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                                           雌二醇Elisa試劑盒的原理及操作步驟
雌二醇Elisa試劑盒中的雌二醇是卵巢分泌的類固醇激素,是主要的雌性激素,負責調節女性特征、附屬性器官的成熟和月經-排卵周期,促進乳腺導管系統的產生,雌二醇是人體一種重要的黃體解體劑,雌二醇主要是卵巢濾泡和胎盤的睪酮合成的,在腎臟也能合成少許,睪酮與雌二醇的轉換是芳香酶系統完成的,血漿中雌二醇是一種動態過程。

 

將雌二醇抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的雌二醇與連接于固相載體上的抗體結合,然后加入*化的雌二醇抗體,將未結合的*化抗體洗凈后,加入HRP標記的親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度,計算樣品濃度。

 

加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于雌二醇Elisa試劑盒中,置37℃孵育1小時。然后洗滌,同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔。
用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/毫升。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過一夜。次日棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
加酶標抗體于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1毫升。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
終止反應于各反應孔中加入2M硫酸0.05毫升。

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