ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型成為有色的氧化型，ELISA查看試劑盒呈現顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來斷定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。
實際上每一測定體系應該用實驗求出各自的S/N的閾值。
更應留神的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。
現在主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運用的類型須取決于多個要素，包括微孔板的表面ELISA查看試劑盒、吸附的抗原、您的抗體和查看試劑。好的封閉液應降低非特異性聯絡，但它不應當與抗原、抗體或查看試劑發生彼此作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、安穩，在去掉洗刷過程中的一些非特異聯絡上很有用。
ELISA試劑盒測定方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
（2）酶符號的抗原或抗體，稱為“酶聯物"、“聯絡物"（conjugate）；
（3）酶反應的底物。根據試劑的來歷和標本的情況以及查看的具體條件，可規劃出各種不同類型的查看方法。
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA試劑盒非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據現已運用的效果，以為ELISA試劑盒法具有活絡、特異、簡略、敏捷、安穩及易于自動化操作等特色。
有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反應后發生的本底或許較正常人血清的本底低得多。
ELISA試劑盒在實驗條件（包括試劑）較難保證安穩的情況下，這種差異法較為合適。