當前位置:上海酶聯生物研究所>>技術文章>>ELISA試劑盒有哪些應用好處和效果
ELISA試劑盒是免疫確診中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所導致的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫確診。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,依據現已運用的成果,以為ELISA法具有活絡、特異、簡單、迅速、安穩及易于自動化操作等特點。不只適用于臨床標本的查看,并且因為一天之內能夠查看幾百乃至上千份標本,因而,也適合于血清流行病學查詢。本法不只能夠用來測定抗體,并且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種前期確診的杰出方法。
因而ELISA試劑盒可概括四個方面:
1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
2、研討抗酶抗體的合成。
3、閃現微量的免疫沉淀反響。
4、定量檢查體液中抗原或抗體成份。
操作流程如下:
(1)待測樣品孔中每孔參加待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,參加純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反響液,用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去),以后將洗刷液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖擺。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗刷3-4次。
(4)陰性對照孔每孔參加PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔參加1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-符號的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,ELISA試劑盒悄悄混勻10s,置37℃暗處反響15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4停止反響。
(12)別離測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終究測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,核算S/N值。S/N≥2.1為陽性斷定規范。
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