ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有對(duì)等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的時(shí)機(jī)，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)前進(jìn)溫度有助于加速顯色進(jìn)行。
在定量測(cè)定中，參與底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)矩力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)間通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯況恰當(dāng)縮短或延伸反應(yīng)時(shí)間，及時(shí)區(qū)分。
這是一個(gè)逐，因而需經(jīng)渙散才干抵達(dá)反應(yīng)的結(jié)尾。在這以后參與的酶符號(hào)抗體與固相抗原的聯(lián)絡(luò)也相同如此。這便是為何ELISA查看試劑盒反應(yīng)老是需要一定時(shí)間的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。
ELISA試劑盒測(cè)定技能的展開(kāi)首要在于方法學(xué)的展開(kāi)，而方法學(xué)的展開(kāi)依托于試劑生產(chǎn)技能不斷前進(jìn)更新和型符號(hào)物的運(yùn)用。
37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體聯(lián)絡(luò)的適合溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反應(yīng)通常在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，商品的生成可達(dá)。
可前進(jìn)反應(yīng)的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在ELISA查看試劑盒中通常不予選用。
反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的要素。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反應(yīng)查詢(xún)效果。
但為保證實(shí)驗(yàn)效果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)矩的恰當(dāng)時(shí)間閱讀效果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸削弱，至2小時(shí)后即可*闌珊至無(wú)色。TMB的中止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)中止。這類(lèi)中止劑尚能使藍(lán)色堅(jiān)持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24小時(shí))不褪，是目視區(qū)分的出色中止劑。此外，各類(lèi)酸性中止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。
ELISA試劑盒分子生物學(xué)正在并終究肯定會(huì)讓對(duì)悉數(shù)生命科學(xué)有一個(gè)悉數(shù)而*的知道，其對(duì)免疫測(cè)定技能展開(kāi)的影響也是直接而又有效的，對(duì)曾經(jīng)一些難以查看的生物活性物質(zhì)的測(cè)定，并且大大前進(jìn)了查看的靈敏度和特異性。