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液相色譜儀操作步驟

閱讀:983發布時間:2017-8-9

液相色譜儀操作步驟:

 

 

1)過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜。

 

2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

 

3)打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,鏈接監測系統。

 

4)進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。

 

5)有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10ml/min

 

6)調節流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000.點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。

 

7)設計走樣方法。點擊file。選取select users and methods,可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊 new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:a.進樣前的穩流,一般2-5分鐘; b.基線歸零; c.進樣閥的loading-inject轉換; d.走樣時間,隨不同樣品而不同。

 

8)進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。

 

9)關機時,先關計算機,再關液相色譜。

 

10)填寫登記本,由負責人簽字。

 

注意事項:

 

1)流動相均需色譜純度,水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

 

2)柱子是非常脆弱的,*次做的方法,先不要讓液體過柱子。

 

3)所有過柱子的液體均需嚴格地過濾。

 

4)壓力不能太大,不要超過2000psi

 

1.使用“保護柱”,能夠延長色譜柱的使用壽命。簡單的說,“保護柱”即是很短的色譜柱,填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的“保護柱”,可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質。而達到延長柱子壽命的效果。如果使用“保護柱”不當會造成反效果。因為都在保護柱使用過程中。如污染達到一定程度而沒有及時更換,累積的雜物很可能會沖入色譜柱中,反而會造成色譜柱損壞。因此。使用“保護柱”時,zui重要的是要知道什么時候該保護柱。該換的時候就必須要立即更換。

 

2.選擇高品質的柱子,并注意使用方法;可以延長柱子的使用壽命。一般認為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質都相同,對品質管理很嚴格的廠家而言,這種說法是成立的。但如果廠家質管理不夠嚴格,即使是同一批號的新柱子之間的品質也有差異。所以,選用柱子時必須選擇管理嚴格的高品質柱子,我們知道,任何柱子使用過后都會產生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用,柱子更易產生變化。因此,盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發信分析方法時,許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經使用。柱性會改變;如此一來,使用舊柱子開發出來的新分析方法,很可能在使用同廠牌的新柱子分析時。發生無法達到預定效果的情況。總的說。開發新分析方法時使用品質好的新主子;并且一直柱子使用在一種分析方法上;則柱子壽命可以延長。

 

3.定期沖洗柱子可以延長柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時間后總會有一些雜質累積在柱內。這些雜質不會隨著流動相出來,自然會逐漸影響柱子的品質。這些雜質在后來的分析譜圖上出現。而造成出現怪峰、基線不平等現象。簡單的解決方法是用較強的流動相沖洗。是在每次分析某一產品完成后沖洗。如果分析時使用緩沖劑時,用水來取代緩沖劑。先使用有機和水的混合溶液為流動沖洗緩沖劑。接著再用100%有機溶劑沖洗。如果不先用有機和水的混合溶液沖洗,而直接用100%有機溶劑沖洗的話,緩沖劑很可能會沉淀出來,而損壞柱子的品質。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了。專家建議將100%有機溶劑沖洗的條件加在分析實驗程序完畢的zui后,如此一來每天在開機前都會用100%有機溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理,即是在將沖洗前將柱子倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前,先參考柱子的保養說明書。所以要真正保護柱子,使用柱子的壽命延長,是使用“保護柱”和定期沖洗柱子。

 

 


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