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體內細胞培養及其操作步驟

閱讀：139發布時間：2015-7-23

1.瘤細胞懸液接種
（1）無菌選取生長良好瘤組織或對數生長期培養瘤細胞。
（2）在PBS中將瘤*碎后用勻漿器研磨，經80～100目篩網過濾成細胞懸液。
（3）培養細胞應用PBS洗兩遍。
（4）計數并調整細胞濃度至107～108／ml。
（5）常規消毒后，于接種部位。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些。
（6）次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，zui后固定為一個相對穩定的時間。
2.腹水瘤的建立與腹水瘤的接種　將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。
（1）將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數。
（2）消毒動物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞。
（3）接種腹水瘤細胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
（4）抽取的腹水經3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存備用。

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