ELISA試劑盒的成果斷定分為定性和定量?jī)煞N ，在間接法和夾心法ELSIA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)賽法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。那么兩類成果怎么判別呢？南京森貝伽生物技術(shù)為您解析：
（1）間接法和夾心法
這類反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標(biāo)本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色清晰者為陽(yáng)性。但在ELSIA中，正常人血清反響后常可呈現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的構(gòu)成和試驗(yàn)的條件不一樣而異，因而試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽(yáng)性的目標(biāo)。
目視法簡(jiǎn)捷明晰，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽(yáng)性對(duì)照（P）、和陰性對(duì)照（N）的吸光值，然后進(jìn)行核算。核算方法有多種，大致可分為陽(yáng)性斷定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。
ELISA試劑盒陽(yáng)性斷定值
陽(yáng)性斷定值（cut-off value）通常為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽(yáng)性或陰性的規(guī)范。
用此法判別成果請(qǐng)求試驗(yàn)條件非常穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)契合一定的規(guī)格，須配用精細(xì)的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)則操作。陽(yáng)性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過(guò)對(duì)很多標(biāo)本的試驗(yàn)檢查而得到的。現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。ELISA檢查試劑盒試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后，先核算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)（NCX）和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有用。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭核算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上規(guī)模，則該次試驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性斷定值按下式核算：陽(yáng)性斷定值=NCX+0.05，標(biāo)本A值＞陽(yáng)性斷定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。
依據(jù)以上敘說(shuō)能夠看出，在這種方法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用，試劑蛻變和操作不當(dāng)均會(huì)發(fā)生"試驗(yàn)無(wú)效"的成果。
b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
ELISA試劑盒試驗(yàn)條件（包含試劑）較難保證穩(wěn)定的情況下，ELISA試劑盒這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這里的P不代表陽(yáng)性（positive），而是患者（patient）的縮寫(xiě)，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。
會(huì)員1.png)