（1） 顯色
顯色是ELISA中的終究一步溫育反響，此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當進步溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時刻應按規則力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時刻通常不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反響時刻，及時判別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反響應避光進行，顯色反響結束時參加停止液停止反響。OPD產品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反響調查成果。但為確保實驗成果的安穩性，宜在規則的恰當時刻閱讀成果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達高峰，隨即逐步減弱，至2小時后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色保持較長時刻（12-24小時）不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
（2） 比色
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板準確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的實驗，需先將板置于規范96孔的座架中，才可進行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪凈，這么，此板就可*平妥坐入座架中。比色時應先以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經任何反響僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液替代標本作全過程的孔），以記載本次實驗的試劑情況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行核算。比色成果的表達以往通用光密度（oplical density，OD），現按規則用吸光度（absorbence，A），兩者意義相同。通常的表明辦法是，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm，表明辦法為"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指于測讀ELISA成果吸光度的光度計。對于固相載體方式的不一樣，各有特制的適用于板、珠和小試管的規劃。許多試劑公司配套供給酶標儀。酶標儀的主要功能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重復性、準確度和可測規模、線性等等。的酶標儀的讀數通常可準確到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。舉例說，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的實在A值應為1.083±0.01（1.073~1.093），重復測定數次，其A值均應1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標儀的可測規模視各酶標儀的功能而不一樣。一般的酶標儀在0.000~2.000，新類型的酶標儀上限拓寬達2.900，乃至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表明。應留意可測規模與線性規模的不一樣，線性規模常小于可測規模，比如某一酶標儀的可測規模為0.000~2.900，而其線性規模僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制造規范曲線時應予留意。 酶標儀不應安頓在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀器15-30分鐘，測讀成果更安穩。測讀A值時，要選用產品的靈敏吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，在zui適波長（W1），第二次在不靈敏波長（W2），兩次測定間不移動ELISA板的方位。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，終究測得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可削減由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。各種酶標儀功能有所不一樣，使用中應具體新聞記者說明書。
