這類反響的ELISA試劑盒定性作用可以用肉眼區別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后常可出現呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構成和試驗的條件不一樣而異，因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構成應為不含受檢物的正常血清或類似物（見3.6）。在用肉眼區別作用時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的政策。此刻酶催化無色的底物生成有色的產品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在一定時刻內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當前進溫度有助于加快顯色進行。ELISA試劑盒在定量測定中，參加底物后的反響溫度和時刻應按規則力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行，時刻通常不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的恰當縮短或延伸反響時刻，及時區別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反響結束時參加間斷液間斷反響。OPD產品用硫酸間斷后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上，邊反響查詢作用。但為確保試驗作用的穩定性，宜在規則的恰當時刻閱讀作用。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達高峰，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時后即可*衰退至無色。TMB的間斷液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響間斷。這類間斷劑尚能使藍色堅持較長時刻（12-24小時）不褪，是目視區別的出色間斷劑。此外，各類酸性間斷液則會使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
