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上海紀寧實業有限公司

ELISA捕獲包被法檢測抗體原理及其簡單步驟

時間:2019-11-22閱讀:18974
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做實驗的時候你知道ELISA捕獲包被法檢測抗體原理和步驟嗎,上海豐壽生物科技有限公司來告訴你。

一、原理

捕獲包被法(亦稱反向間接法)ELISA,主要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定。以目前常用的IgM測定為例,因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在,則后者可干擾IgM的測定。因此先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于傳染病的早期診斷中。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然后加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類風濕因子(RF)同樣能干擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。


捕獲法測抗體的簡要操作步驟:


1.特異性捕獲抗體的包被,先把能特異性結合待測抗原的抗體固定于固相載體表面;


2.加入待測樣品,通過固定在載體表面的針對該抗原的抗體固定于載體表面;


3.加入特異性抗原以及針對該特異性抗原的酶標抗體;


4.加入酶促反應底物,發生顯色反應,顯色的深淺與待測抗體的量成正比。


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