看似簡單的ELISA實驗在操作過程中稍有不合理的地方，會造成很多問題，影響檢測精度，降低測試質量。如花板，假陽性，全彩色，全彩色，顏色空間的低等問題，這就要求我們在實驗過程多做總結，逐步完善，篩選ELISA實驗各項步驟中的重點之重。
*：包衣液的選擇
碳酸鹽緩沖液通常選擇9。6。但有時因為測試需求，數據包緩沖溶液是一種特殊的原料可采用中性包裝。應注意以下原則：蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合，取決于在固相的疏水性基團和疏水性相互作用的載體表面蛋白分子的結構，物理吸附是非特異性的，蛋白分子量，等電點，大集中，小分子蛋白蛋白質通常含有疏水基團越多，所以更容易吸附在固相載體表面。測試也有很強的理論于實踐，看zui后一個可以應用到我們的測試。除了剛才提到的9。6碳酸鹽緩沖液常用的涂料溶液，和磷酸鹽緩沖液和7-8 7。2 -緩沖。
第二：關閉
以下包之后是無關的蛋白質溶液濃度高，涂層工藝。隨函附上使大量不相關的蛋白質充填這些空隙，和干擾物質的免疫排斥和吸附步驟。ELISA試劑盒常用的密封：0。05% - 0。5%牛血清白蛋白；10%或1%明膠牛血清；脫脂奶粉，價格相對低廉，可用于高濃度(5%～10%)；和一些罕見的使用各種動物血清(主要是為了消除類似的蛋白和酪蛋白等干擾)。但到底選擇什么，根據實驗的具體實踐。
第三：洗板
可以說，在中操作，清洗是在主要的關鍵技術。由于聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍存在的，為了實現自由酶與客觀相結合的標記的分離，在板料孔中殘留游離和吸附的非特異性干擾物質的去除，洗滌，并應將干擾物質洗滌下來的非特異性吸附。所以在洗衣板會有一定的誤差，非常人的因素(當然也有洗衣機除條件)，是不完整的或弦清孔，系統的影響是如此敏感，但不小。
第四：加抗體(抗標本和兩個)
注意的槍頭，樣品用稀釋稀釋，也可以用稀釋的閉解。如果要添加兩個電阻，但也要注意兩個反工作濃度的廢物，太高，太低的光的顏色。
