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按照培養(yǎng)基配方,把大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、植物激素分類,每一類中各種藥品分別稱量,如N6培養(yǎng)基各種母液的配制步驟如下:
大量元素母液:包括用量較大的幾種化合物,按表中排列順序,將每種藥品的用量擴(kuò)大10倍,分別稱取,分別溶解,然后按照順序混合在一起。如鈣鹽等易發(fā)生沉淀的藥品不能混合,應(yīng)單位定容,zui后加上蒸餾水,定容至1升或500毫升。在定容時(shí)注意用蒸餾水洗凈燒杯和玻璃攪棒以減少誤差。定容后的溶液為大量元素母液,配制培養(yǎng)基時(shí),每配1 L培養(yǎng)基需吸取該母液l00 ml或50 ml。
微量元素培養(yǎng)基母液:因用量少,為了稱量和方便,常配成100倍或1000倍的母液,即每種藥品擴(kuò)大l00倍或者l000倍。逐個(gè)溶解,混合在一起成為微量元素母液,每配1 L N6培養(yǎng)基需吸取該母液10 ml或者1 ml。
鐵鹽:在N6培養(yǎng)基中需要單獨(dú)配制,它是由*(FeSO4•7H2O)2.78 g和乙二氨四乙酸二鈉(Na2-EDTA)3.73 g,分別溶解,混合后,用酒精燈加熱半小時(shí)以上,冷卻后定容至1 L。冰箱過夜貯藏?zé)o結(jié)晶析出,否則重新配制。每配l升N6培養(yǎng)基需加該鐵鹽母液5 ml。
有機(jī)物質(zhì):主要指氨基酸,維生素類物質(zhì)。它們大都是擴(kuò)大1000倍,分別稱量,分別定容和儲(chǔ)存,配制培養(yǎng)基時(shí)按需要的量加入。
植物激素:常用的有生長(zhǎng)素類如:2,4-D、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA);細(xì)胞分裂素類:激動(dòng)素(KT)、6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)。配制時(shí)需要單個(gè)稱量,根據(jù)需要可分別用酸、堿或酒精等不同的溶劑溶解后,再用蒸餾水配制成所需的濃度,一般為每ml含0.1-2 mg,配制培養(yǎng)基時(shí)按所需要的量分別加入,本實(shí)驗(yàn)中的2,4-D和6-BA均配成1 mg/ml的母液。
在配制吲哚乙酸(IAA)母液時(shí),先用幾滴95%酒精溶解*后,加蒸餾水定容,否則會(huì)發(fā)生沉淀。而配制6-BA母液時(shí),要用少量的1 mol/L NaOH溶解;而配制2,4-D時(shí),可先用少量的95%酒精溶解。
各種母液配制好后,要貼好標(biāo)簽,注明母液的名稱,配制1 L培養(yǎng)基需要的吸取量、母液配制的日期,然后放入冰箱中儲(chǔ)存。一般無機(jī)物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上,有機(jī)物質(zhì)的母液保存時(shí)間在半年以內(nèi),但若發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變,應(yīng)立即需重新配制。
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