谷研試劑-裂解細胞

          elisa試劑盒可以采用多種不同的方法裂解組織，依據所研究的細胞或組織的類型不同以及抗原的zui終用途選擇適當的方法。對無細胞壁的細胞用溫和的去污劑即可溶解。反之，則需采用某些機械的剪切或酶消化法來去除細胞壁。如果經過zui后處理的抗原不需保持完好的三維結構或生化活性，細胞可在比較劇烈的變性條件下裂解，然后將變性劑稀釋，再加入特異性抗體。

             elisa試劑盒許多提取條件均可以使各種蛋白酶釋放，若釋放到裂解液內的蛋白酶其消化作用影響免疫沉淀，則可采取兩種方法減弱其作用。首先，必須保持標本冷卻，因溫度可影響大多數蛋白酶的降解速度。其次，可在溶解緩沖液內加入蛋白酶抑制劑。以下為常用的蛋白酶抑制劑，其中aporotinin和苯甲基磺酰氟化物(PMSF)zui常用。但是幾種蛋白酶抑制劑混合使用，特別是作為進一步試驗的起點時，這樣有助于確定該抗原的*抑制劑。

    其他來源細胞的裂解    幾乎所有來源的材料均可作為免疫沉淀的起點，包括不同來源的整個器官、冰凍的組織塊、血樣、層析柱分部洗脫液或環境樣本。若樣本要求裂解細胞以釋放抗原，則是進行一系列對照實驗以確定的提取方法。總之，其原則是在釋放盡可能多抗原，引起盡可能少的蛋白變性的前提下將可溶性抗原從顆粒基質中分離出來，而且要避免或消除大分子DNA進入溶液。裂解液的量要減少至壓積細胞量的10倍，在允許的情況下可增加至50—100倍。zui后應注意的是所有的操作在冰上進行，保持盡可能低的溫度以減少所釋放的蛋白酶降解抗原的能力。另外，除非有特殊要求，推薦使用蛋白酶的抑制劑。