谷研試劑-T、B細胞表型抗體免疫組化敏感性與特異性分析

摘要　目的：探討T、B細胞非霍奇金淋巴瘤免疫表型染色的特異性和交叉反應性。方法：應用S-P免疫組織化學方法對62例非霍奇金淋巴瘤進行CD20、CD74、CD45RO、CD43和CD3免疫表型測定。結果：發現B細胞表型抗體CD20和CD74對B細胞非霍奇金淋巴瘤染色陽性率達88.2%～100%，但CD74的特異性不強，與T細胞有26.7%(4/15)～35.7%(5/14)的交叉反應，而CD20表現出高度的特異性，交叉反應為0。T細胞表型抗體CD45RO、CD43和CD3對T細胞非霍奇金淋巴瘤染色陽性率達85.7%～100%，但CD45RO和CD43對B細胞的交叉反應高達40%(6/15)～47.1%(8/17)，特異性不強，而多克隆抗體CD3與B細胞僅有5.9%(1/17)的交叉反應，表現出明顯的特異性。結論：提示在進行T、B細胞免疫表型劃分時，應使用一組包括CD20、CD74，CD45RO、CD43和CD3等抗體，CD3是一種具有高度敏感性和高度特異性的T細胞標志抗體，值得推薦。
關鍵詞　淋巴瘤，B細胞；淋巴瘤，T細胞；免疫表型分型；免疫組織化學
中國圖書分類號　R733.4； R392　　文獻標識碼　A　　文章編號　1001-7399（1999）01-0015-03

Specifity and reactivity of antibodies of B-cell and T-cell immunophenotype

1Chen Linying, 1Zhang Sheng, 2Wang Xiaoya
(1Dept of Pathol, First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou　350005; 2Fuzhou Maxim Biotech Inc, Fuzhou　350002)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the specificity and reactivity of antibodies of B-cell and T-cell of NHL. Methods　Sixty-two cases of NHL were examined for CD20、CD74、CD45RO、CD43 and CD3 using S-P immunohistochemical methods. Results　The positivity rates of CD20 and CD74 in B-cell NHL were 88.2%～100%， and the reactivity of CD74 with 26.7%～35.7% of T-cell NHL suggested that it may lack specifity; However, CD20 as high specificity as its cross-reactivity was zero. The staining rates of CD45RO，CD43 and CD3 with T-cell were 85.7%～100%. The cross-reactivity of CD45RO and CD43 with B-cell was 40%～47.1% and their specificities were lack, but the polyclonal CD3 only reacted with 5.9%(1/17) B-cell NHL and had very high specificity. Conclusion　For determination of B-cell and T-cell immunophenotyping a panel of antibodies comprising CD20、CD74，CD45RO，CD43 and CD3 is recommended. CD3 is a antibody of T-cell marker with high sensitivity and specificity.
KEY WORDS　lymphoma, B-cell; T-cell; lymphoma; immunophenotyping; immunohistochemistry

非霍奇金淋巴瘤的分類方法很多，通常以Lukes-Collins免疫功能分類為基礎，也即以現代免疫學觀念和新技術用于淋巴瘤的研究，產生以形態學與功能相結合的免疫功能分類，即將非霍奇金淋巴瘤分為B細胞、T細胞和組織細胞三大類的不同亞型。的表型劃分對于惡性淋巴瘤的正確分類是非常重要的。通常是用一組可用于石蠟切片的抗體對淋巴瘤進行免疫分型，這包括許多種能識別B或T細胞抗原的試劑，包括CD20、CD74、CD43、CD45RO和CD3等抗體。然而其中有些為大家所常用的淋巴瘤分類抗體，在進行免疫組化染色時表現很強的交叉反應性，這種現象很大程度上困擾著我們對淋巴瘤的分類。本文應用一組B、T細胞淋巴瘤，對這些試劑免疫組化染色的敏感性和特異性進行分析。

1　材料和方法

1.1　組織標本　收集福建醫科大學附屬*醫院1994～1998年常規活檢標本62例，常規福爾馬林固定，24 h內取材，4 μm厚連續切片，經病理診斷為淋巴瘤，參照修正后的Kiel分類方法〔1〕。
1.2　試劑　CD20(L26)，CD74(LN2)，CD3(多克隆)，CD45RO(UCHL1)，CD43(MT-1)抗體及S-P(廣譜)試劑盒均購自美國Maxim Biotech公司(由福州邁新公司提供)，操作按說明書進行。
1.3　微波抗原修復　組織切片常規脫蠟至水化，用微波爐(National家用微波爐)行抗原修復。先用中檔4～6 min對檸檬酸緩沖液進行升溫，待見到輕度沸騰后即用中低檔保溫10 min(可見到微小氣泡)；一抗孵育2 h(室溫25℃左右)，常規DAB-H2O2顯色8 min，蘇木素復染。

2　結果

本組62例非霍奇金淋巴瘤患者，年齡19～77歲，平均46.4歲，其中男性37例，女性25例。按修正后的Kiel分類法，B細胞非霍奇金淋巴瘤33例，其中低度惡性17例，高度惡性16例；T細胞非霍奇金淋巴瘤29例，其中低度惡性14例，高度惡性15例。
總體觀察微波抗原修復染色結果，在所有病例中免疫組化陽性染色為帶有微弱的漿染色、細胞膜染色，組織結構清晰，未見明顯背景染色。
62例非霍奇金淋巴瘤行免疫組化染色結果(圖1～8)。

圖1 低度惡性B細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽性。S-P×400

圖2 低度惡性B細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陰懷。S-P×400

圖3 高度惡性B細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽性。S-P×400

圖4 高度惡性B細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽性。S-P×400

圖5 低度惡性T細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽性。S-P×400

圖6 低度惡性T細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽性。S-P×400

圖7 高度惡性T細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽性。S-P×400

圖8 高度惡性T細胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽性。S-P×400

2.1　B細胞非霍奇金淋巴瘤　17例低度惡性的B細胞非霍奇金淋巴瘤中，B細胞表型標志的CD20和CD74染色陽性率分別達94.1%(16/17)，88.2%(15/17)；而作為T細胞表型標志的CD45RO，CD3和CD43對B細胞的染色交叉率分別為44.2%(7/17)，5.9%(1/17)，47.1%(8/17)。
16例高度惡性的B細胞非霍奇金淋巴瘤中，CD20和CD74染色陽性率分別達100%；而CD45RO、CD3和CD43對B細胞的染色交叉率分別為43.7%(7/16)，0(0/15)，40.0%(6/15)。
2.2　T細胞非霍奇金淋巴瘤　14例低度惡性的T細胞非霍奇金淋巴瘤中，作為T細胞表型標志的CD45RO、CD3和CD43陽性染色率分別為85.7%(12/14)，100%(14/14)，100%(14/14)；而作為B細胞表型標志的CD20和CD74對T細胞的染色交叉率為0(0/14)和35.7%(5/14)。
15例高度惡性的T細胞非霍奇金淋巴瘤中，CD45RO；CD3和CD43 陽性染色率分別為100%(15/15)，86.7%(13/15)，93.3%(14/15)；而CD20和CD74對T細胞染色交叉率為0(0/15)和26.7%(4/15)。
在對B細胞非霍奇金淋巴瘤染色中，CD20和CD74的染色陽性率可達88.2%～100%，T細胞標志的CD45RO和CD43 對B細胞的染色交叉率高達40%～47.1%；僅對CD3在17例低度惡性的B細胞非霍奇金淋巴瘤中的1例陽性染色，在高度惡性的B細胞非霍奇金淋巴瘤中CD3未見染色交叉性。
在對T細胞非霍奇金淋巴瘤的染色中，CD45RO、CD3和CD43 的染色陽性率可達85.7%～100%；B細胞標志的CD20對T細胞的染色交叉率為0，但CD74對T細胞的染色交叉率達26.7%～35.7%。

3　討論

本研究結果發現，對于B細胞免疫表型染色的CD20和CD74是兩種敏感性很強的標志物，同時CD20具有高度的特異性，CD20對T細胞非霍奇金淋巴瘤的染色交叉率為0。但CD74對淋巴瘤的免疫表型特異性不強，與低度惡性(5/44)和高度惡性（4/15）的T細胞淋巴瘤有染色交叉性。
同樣對于T細胞免疫表型的染色來說，CD45RO、CD3和CD43具有高度的敏感性，染色率達到85.7%～100%；但為大家所常用的CD45RO和CD43在對B細胞淋巴瘤進行免疫分型時其染色的交叉性高達40%～47.1%，特異性不強；相反多克隆的CD3卻表現出明顯的特異性，僅1例濾泡中心性淋巴瘤有較弱的膜染色。
許多研究〔2，3〕表明，任何單*種的淋巴細胞標志物均不可能在所有的淋巴瘤病例中都呈現出100%的陽性染色，我們的結果與此相似，CD20和CD74對B細胞染色率為88.2%～100%，CD45RO、CD3和CD43對T細胞的染色率為85.7%～100%。Kreft等〔4〕發現CD20與10例T細胞非霍奇淋巴瘤中的2例存在交叉反應，我們未發現這一現象。Dobson等〔5〕也發現作為T細胞標志的CD43與B細胞非霍奇金淋巴瘤有42.4%(14/33)的免疫染色交叉反應，我們的結果與此相似。我們發現CD74對T細胞的染色交叉率達16.7%～35.7%，CD45RO和CD43對B細胞的交叉染色率達40%～47.1%，而CD3僅5.9%(1/17)。這就表明在進行淋巴瘤細胞免疫表型劃分時需要使用一組標志物進行染色，即當疑為B細胞淋巴瘤時應采用B細胞表型抗體CD20、CD74加上T細胞表型抗體CD3和(或)CD45RO或CD43等；而疑為T細胞淋巴瘤時，應用T細胞表型抗體CD45RO、CD3、CD43加上B細胞表型抗體CD20和(或)CD74等抗體。
對于T細胞的表型染色，CD3多克隆抗體近來已被認識為具有高度敏感性和特異性，是一種可靠的T細胞表型染色的核心成員。CD3復合物由多種亞單位組成〔6〕，當與抗原接觸時作為T細胞受體(TCR)復合物的信號傳導單位，我們所經常使用的抗-CD3多克隆抗體是直接作用于CD3復合物的ε亞單位上。ε亞單位是一種非糖基肽，既往認為抗體為多克隆性抗體存在某些缺點，例如存在批間差異(此通過操作者的質控而減到zui小)，有相對較深的背景染色(應用微波抗原修復可減輕此抗體的背景染色)以及操作上的不方便。即需要使用不同的二抗(此已為廣譜二抗的應用而消除)。
對于T細胞淋巴瘤的診斷，通常有多種抗體可供使用，如CD45RO、CD3和CD43等。但為大家所廣泛使用的抗體CD45RO和CD43對B細胞、粒細胞、巨核細胞和組織細胞具有明顯的染色交叉性，因此不具有細胞譜系的特異性。Chetty和Gatter〔7〕綜述了10位作者的研究，與其他的T細胞標志抗體相比較，CD3(多克隆)免疫組化染色率在51%～100%之間；我們結果與他們相似，同時對B細胞非霍奇金淋巴瘤的染色交叉率僅為5.9%，因此，CD3具有T細胞譜系免疫染色的特異性。他們建議使用一組標志抗體包括CD3和CD45RO(UCHL1)，作為非霍奇金淋巴瘤常規的免疫組化染色抗體。
總之，在進行非霍奇金淋巴瘤免疫表型劃分時，建議使用一組抗體，包括CD20、CD74、CD3、CD43、CD45RO等；同時本實驗表明CD3是一種具有高度敏感性和高度特異性的T細胞標志抗體，值得推薦使用。