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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
精子細胞氧化應激活性氧NBT比色法定量檢測試劑盒
2016-2-29 閱讀(1022)
主要用途
精子細胞氧化應激活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測試劑是一種旨在通過硝基藍四氮唑染料，受到超氧陰離子O2-的還原，產生不溶性藍黑色色素沉淀，由分光光度儀比色分析，定量檢測精子細胞內活性氧族的生成和增加的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適用于動物和人體精子細胞的活性氧族的檢測。可以被用于細胞凋亡、衰老、代謝和營養學，以及發育生物學（男性不育）等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態氧氣（singlet oxygen）等細胞內活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產生和增多，甚而導致諸如男性不育、冠心病、風濕性關節炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。其中精子細胞（spermatozoa）對于活性氧較為敏感：低濃度活性氧可以調節正常精子功能、精子獲能、頂體反應、精卵融合等；高濃度活性氧則影響精子細胞的質量和功能，因為精子細胞質膜含有大量不飽和脂肪酸，胞漿含有少量的祛除活性氧的相關酶蛋白，由此活性氧容易造成精子質膜的流動性和DNA完整性受到損害，精子運動能力降低，不能參與受精活動，zui終導致特發性不育癥（idiopathic infertility）。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），是一種黃色水溶性硝基替代性芳香族四氮唑化合物，與細胞內超氧陰離子O2-反應而被直接還原，產生不溶性甲暨色素，在分光光度儀下（650nm波長），呈現吸光峰值的變化。據此定量檢測精子細胞內氧化應激活性氧族的濃度。
實驗步驟
一、樣品預處理
1．移取2毫升新鮮收集（1小時內）的精液到2毫升錐形離心管
2．放進37℃培養箱孵育20分鐘
3．放進臺式離心機離心7分鐘，速度為300g
4．小心抽去上清液
5．加入2毫升清理液（Reagent A），混勻精子細胞顆粒群
6．放進臺式離心機離心7分鐘，速度為300g
7．小心抽去上清液
8．加入適量的清理液（Reagent A）
9．充分混勻后，在血細胞計數器上進行精子細胞計數
10．調整精子細胞數為1 X 107/毫升
11．放進37℃培養箱里備用（1小時內）
注意事項
1．本產品為100次（96孔板）操作
2．操作時，須戴手套
3．孵育時，須避免光照
4．測試前，精子細胞須新鮮收集，1小時內為適合
5．精子細胞懸液制備后即刻測讀，不宜過夜保存
6．精子細胞懸液須清澈
7．如果需要排除精液白細胞的干擾，建議純化精子細胞：精子細胞高純分離試劑盒（14003）
8．如果需要區分精液各種成分的活性氧生成情況，建議使用精漿（seminal plasma）氧化應激活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測試劑盒（14007.1）
9．本產品適合凍存的精子細胞檢測
10．如果活性氧濃度過低，可以延長孵育時間至2小時
11．本公司提供系列精子細胞分析試劑產品
