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elisa酶聯免疫斑點試驗優勢    

    elisa酶聯免疫斑點試驗優勢可以追溯到1963年，溶血空斑技術，到1983年后的20年，該方法只表現出高靈敏度，操作簡便。才開始大顯身手的檢測。所以，酶聯免疫斑點試驗法和其他現有技術中，這樣做的優點？

    elisa酶聯免疫斑點試驗約會從1963年起，誰創立杰尼溶血空斑技術（溶血性斑塊形成細胞檢測， HPF ） ，這種技術可以用來檢測和計數單抗體形成細胞。 Czerkinsky如分泌特異性抗體的細胞數在脾細胞中檢測到了該方法使用的成熟的單克隆抗體的技術，在1983年，發現高靈敏度的方法是簡單的。后來，他們通過這種方法定量分析有絲分裂原刺激的外周血細胞分泌IFN2γ的數量。隨后，在單細胞水平的酶聯免疫斑點試驗法檢測分泌其他細胞因子（如IL- 2 ， IL-4， IL - 5 ，IL-10 ，TNF-α和IL-6 ） ，通過設數量。諾思通等用生物素 - 抗生物素蛋白生物擴增方法，提高了該方法的靈敏度，杜林計算機輔助圖像分析系統（電腦輔助視頻圖像分析， CVIA ）酶聯免疫斑點試驗法TNF2α自動分析的大小和數量，計算和負載抗原肽的目標暴露后的外周血單個核細胞（PBMC） ，在抗原特異的CD8 + T細胞數的細胞，不僅提高了大規模的研究的背景染色的分辨率也使其成為可能。 Vaquerano這樣一個數碼相機和計算機相結合，開發了類似的點計數系統，每口井的斑點數量大于100時，這種方法是比較客觀的，可重復的，節省時間。

    隨著elisa酶聯免疫斑點試驗技術的不斷發展，其優勢正在逐漸出現，下面將列出一些傳統的酶聯免疫斑點試驗技術等方面的優勢相比， 。

    elisa酶聯免疫斑點試驗分析，可以可視化的單細胞的分泌產物。在這些分析極為敏感的，因為它是直接在捕捉周圍的分泌細胞，稀釋在表面，或靠近捕獲細胞上的受體，或降解前。zui小到1:100細胞體外頻率測量精度。這個分辨率已經遠遠超過了細胞內的細胞因子，采用四聚體染色和酶聯免疫吸附測量精度。這樣的高靈敏度是至關重要的，因為抗原特異性T細胞在體外是典型的低頻率。高產量?細胞分析是可行的。一個相關的實驗室團隊訓練的數百個樣本，可測試在幾十抗原。只有少數的細胞，可用于通信和其它細胞學分析方法進行了比較。例如， 45毫升的血液是足夠的測試600個不同的抗原/肽反應。您可以定義CD4和CD8細胞的免疫因子的目標。這是因為只有少數細胞可以在高產量模式下進行分析。酶聯免疫斑點試驗法篩選肽庫，繪制免疫因子方面是一個理想的工具。用于確定親和性的抗原特異性T細胞的功能。這zui大可能是50％的肽類藥物的刺激。可以用來研究藥物處理的細胞，而不分泌過程。如果觀察到的凈產量減少，你可以判斷這種差異減少分泌細胞，每個細胞分泌或減少生產。淋巴細胞酶聯免疫斑點試驗檢測后仍然活著。這使得分析后增值盡可能作進一步的分析，克隆或低溫貯存，冷藏后可用于檢測人淋巴細胞，而不會失去其功能。前處理和后處理的樣品測試并排，可重復的結果。

（1 ）酶聯免疫吸附

    通過ELISA的顯色反應，在酶標儀測量吸光度，與標準曲線比較來自可溶性蛋白質聚集體。elisa酶聯免疫斑點試驗的顯色反應，還可以通過細胞分泌的可溶性蛋白質，在相應的位置上的斑點出現清晰可辨的，可直接在顯微鏡下人工計數斑點或通過電腦輔助分析系統進行計數的點，一個點代表一個細胞，蛋白質分泌到細胞中計算出頻率。 （一些研究，不僅要測量的量的細胞因子的產生，需要檢測該細胞因子分泌細胞頻率），因為它是在單細胞水平檢測， ELISPOT比ELISA更敏感，從20萬至30萬個細胞中檢測到一種分泌的的蛋白質。捕獲抗體具有高親和力，高特異性，低內毒素單克隆抗體，來刺激研究者激活的細胞，不會影響分泌細胞因子激活。

（2）和法國四聚體（四聚體的）

    近年來一直存在MHC2 Ⅰ類分子肽四聚體的法國。此方法的優點在于快速，直接，敏感和特異的，即使在身體MCTL水平小于1％ ，與MHC2 Ⅰ抗原肽四聚體的方法仍然可以直接測量靈敏度的值是高于LDA的5?10倍。但是，應用程序的技術，有更多的困難：除了合成的分子和穩定的MHCⅠ類的技術困難，但主要缺點是，抗原表位的選擇。因為每個反應只能分析一個單一的抗原決定簇，和MHCⅠ類分子結合的各種抗原決定簇，形成CTL應答的能力，但與遺傳背景和時間的變化，所以選擇正確的抗原決定簇，就顯得尤為重要。抗原表位篩選可以通過elisa酶聯免疫斑點試驗，但對整個肽庫掃描不是一件容易的事。當然，利用生物信息學的抗原表位篩選有很大的幫助。同時，研究結果表明，并非所有的四聚體陽性細胞鑒定通過準確的功能，四聚體陽性細胞能分泌酶聯免疫斑點試驗法是數10倍INF2γ細胞，其中有許多不表現出一種惰性的功能細胞，可能代表了記憶性CTL前體細胞類型。四聚體分析只增加了敏感性分析，同時測定其功能是非常重要的。

（3）與CR51釋放試驗

    這種方法是更經典的方法中，雖然被CTL識別的抗原多樣性的檢測是非常有效的，并能準確地示出由CTL表位的確認，但至少半定量的水平，但自發CR51標記的細胞釋放率更高，更長的時間是不適合耕種，記下所需的細胞濃度為高，從而帶來不便試用此外， CR51釋放方法，測得的特性的細胞群體，而不是一個單一的細胞。

（4）和細胞內染色CK

    法相比較elisa酶聯免疫斑點試驗法，細胞內染色細胞內CK染色， CK （ ICS）的細胞內積累的主要因子染色和流式細胞儀方法多色參數，檢測循環抗原特異性T淋巴細胞可行的淋巴細胞的方法，酶聯免疫斑點試驗法能夠檢測到所有分泌的CK ECTL 。

應用

    目前，elisa酶聯免疫斑點試驗法已被用于檢測藥物，化學品和其他CK復雜的功能和功能等，因此，調節免疫功能的體內效果提供了一個測試的基礎。近年來，酶聯免疫斑點試驗法技術在評價試驗的癌癥疫苗，免疫監視和免疫學研究被廣泛的應用日益增多。

（1）診斷結核感染人類

    zui近的研究發現，酶聯免疫斑點試驗技術檢測結核分枝桿菌和隱性感染者顯著。通過檢測IFN2γ能指望產生IFN2γ特異性T細胞，作為一種特定的結核分枝桿菌感染的診斷標志物清點人數色斑。應用酶聯免疫斑點試驗試驗具有較高的特異性，敏感性為96 ％，而結核菌素試驗敏感性為69％ 。酶聯免疫斑點試驗法結核桿菌感染更快速，準確地診斷，卡介苗（ BCG ）接種疫苗引起的結核菌素試驗陽性相鑒別。

（2）酶聯免疫斑點試驗技術在抗癌疫苗研究中的應用

    elisa酶聯免疫斑點試驗法技術來監測療效的疫苗已用于分析和評估病人從感染的PBMC （外周血單核細胞）中檢測到在癌癥患者中的腫瘤特異性T細胞疫苗試驗誘導肽特異性T淋巴細胞。能實現自動化識別的腫瘤抗原表位的酶聯免疫斑點試驗法板預先準備的，移液洗板，讀，酶聯免疫斑點試驗定量分析可能是腫瘤或病毒特異性T細胞應答給出。

（3）抗感染免疫中的應用

    CTL （細胞毒性T淋巴細胞）在抗病毒的免疫反應中起著重要的地位， CD4 +輔助性T細胞亞群的Th1 / Th2的平衡，抗感染中起著同樣重要的作用。此外，使用ELISPOT測定法可以檢測CK IFN2γ H IV -特異性CTL反應，免疫相關的信息的?elisa酶聯免疫斑點試驗法也可以用來評估的H IV21粘膜的CD4 + T細胞的免疫應答引起的感染的方法，進一步了解，作為以及? IVgp 120克二氧化碳表達霍亂毒素DNA疫苗的免疫原性。在許多抗菌免疫的研究，該方法還起著重要的作用。

（5）應用器官移植

    受體對供體特異性HLA抗體的存在不僅介導的超急性排斥反應，但也導致急性排斥反應，敏感的患者需要器官捐贈的限制同種抗原，從而提高移植的等待時間。一個單一的抗體分泌細胞elisa酶聯免疫斑點試驗是一個強大和有效的檢測，具有靈敏度高。因此，刺激記憶B細胞的增殖，分化為漿細胞，建立了一種用于檢測特定的HLA- ELISPOT法是抗體產生細胞的*手段。

（6）其他

    此外，elisa酶聯免疫斑點試驗檢測方法移植研究，疫苗開發，TH0 /的Th1 / Th2細胞轉化分析，自身免疫性研究，癌癥研究，過敏機制探索IL24 （白細胞介素- 24 ）誘導的免疫球蛋白亞型轉換，傳染病研究，抗原表位的本地化地圖免疫和體液免疫的研究和其他方面的重要應用。

    elisa酶聯免疫斑點試驗在體內的影響提供了一個測試基準調節免疫功能，從而在癌癥研究，免疫學被廣泛使用。因為，用ELISA法相比，酶聯免疫斑點試驗法更靈敏的，而用有限稀釋法LDA ，酶聯免疫斑點試驗法更容易操作，CK和胞內染色法，酶聯免疫斑點試驗法更廣泛。