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組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法試劑盒樣品準備

2024-12-19  閱讀(32)

  組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法是一種精確的實驗技術,用于定量檢測動物組織中的甘油-3-磷酸脫氫酶活性。以下是使用上海語燕生物提供的定量檢測試劑盒(產品貨號:HL50378.2)進行樣品準備的詳細步驟:
 
  樣品準備步驟
 
  組織采集與稱重:手術取出動物組織,并準確秤重,確保組織重量在200至500毫克之間,以滿足實驗需求。
 
  預冷處理:選擇將組織放入預冷的15毫升錐形離心管中,以保持組織的低溫狀態,防止酶活性變化。
 
  組織清洗:選擇加入上海語燕生物提供的清理液(Reagent A)清洗組織一次,以去除可能影響實驗結果的雜質。
 
  液氮凍存:將清洗后的組織移入液氮凍存管中,以保持組織的活性和穩定性。
 
  液氮冷凍:將組織即刻放入液氮罐中過夜,以確保組織在極低溫度下保持其生物活性。
 
  組織研磨:次日從液氮罐中取出組織,以最快速度用研磨棒碾碎成粉末狀,注意避免組織凍融,以免影響實驗結果。
 
  組織轉移:將研磨后的組織粉末轉移到15毫升錐形離心管中,為下一步裂解做好準備。
 
  裂解液添加:加入預冷的裂解液(Reagent B),根據上海語燕生物的推薦量,精確控制裂解液的體積。
 
  樣品轉移:將裂解后的樣品轉移到預冷的1.5毫升離心管中,以便于后續操作。
 
  渦旋震蕩:強力渦旋震蕩樣品30秒,確保樣品充分混勻,以便于裂解液與組織充分接觸。
 
  冰槽孵育:將樣品置于冰槽中孵育30分鐘,期間每10分鐘進行強力渦旋震蕩30秒,以保持樣品的低溫狀態。如需暫時停止操作,應將樣品存放于-70℃冰箱中。
 
  離心分離:將樣品放入4℃的微型臺式離心機中,以16000g(或13000RPM,如使用Eppendorf 5415型號離心機)的速度離心5分鐘,以分離上清液和沉淀物。
 
  上清液轉移:小心移取500微升上清液到新的預冷的1.5毫升離心管中,以便于后續的蛋白定量檢測。
 
  蛋白定量檢測:移取10微升上清液進行蛋白定量檢測,建議使用上海語燕生物提供的Bradford蛋白質濃度定量試劑盒(貨號:30030.1)進行操作。
 
  樣品保存:將剩余樣品即刻放入-70℃冰箱保存,或置于冰槽中繼續后續操作,以保持樣品的穩定性和活性。
 
  以上步驟詳細描述了使用上海語燕生物的定量檢測試劑盒(產品貨號:HL50378.2)進行組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法樣品準備的過程。遵循這些步驟,可以確保實驗的準確性和可靠性,為后續的實驗分析打下堅實的基礎。


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