Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated
重組霍亂毒素B亞基（CF647標(biāo)記，深紅色熒光）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
重組霍亂毒素B亞基（CF647標(biāo)記，深紅色熒光） | MX0942-100UG | 100μg | 4786 |
背景描述
霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產(chǎn)生的毒力因子，會引起嚴(yán)重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa。由一個A亞基（約27.2kDa）和五個B亞基（約11.6kDa/亞基）組成，B亞基以五聚體環(huán)的方式排列，呈明顯的五度對稱，負(fù)責(zé)毒素識別并吸附細(xì)胞表面的神經(jīng)jie苷脂GM1。
A亞基催化刺激性G蛋白α亞基（Gαs）的ADP核糖基化，降低GTPase活性和活化α亞基。Gαs的活化引起腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性增加，進而促使cAMP水平提高。A亞基還能ADP核糖基化視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤的轉(zhuǎn)運蛋白，使得GTPase失活?；魜y毒素還是一種高效的黏膜疫苗佐劑，通過抑制IL-12生產(chǎn)來誘導(dǎo)2型輔助性T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。
霍亂毒素B亞基（CTB）對細(xì)胞無毒，本質(zhì)上不含腺苷酸環(huán)化酶活性。CTB通過結(jié)合神經(jīng)jie苷脂GM1附著到細(xì)胞上，是小膠質(zhì)細(xì)胞的良好標(biāo)記物（這類細(xì)胞表面富含神經(jīng)jie苷脂GM1），但不適合標(biāo)記少突膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞。CTB是利用組化方法研究軸突運輸?shù)膬?yōu)秀示蹤劑。CTB也是常用的脂筏標(biāo)記物，脂筏是富含膽gu醇和鞘脂的膜微區(qū)，在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)運輸中發(fā)揮重要作用。
產(chǎn)品描述
本品是偶聯(lián)上深紅色熒光素-CF647（Ex/Em=650/665 nm）的重組霍亂毒素B亞基（rCTB），即Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated，簡寫：CF647 conjugated- rCTB，適用于神經(jīng)學(xué)研究中的束路追蹤，靶向神經(jīng)jie苷脂GM1）結(jié)合和逆行運輸。也可在活細(xì)胞或固定細(xì)胞成像中用作脂筏標(biāo)記物和內(nèi)吞示蹤劑。
保存與運輸方法
保存：-20℃保存，至少6個月有效。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 本品以凍干粉形式提供，由于量比較少，初次使用前需置于室溫回溫至少30min，低速離心后，再開蓋直接往瓶內(nèi)加入合適的溶劑進行溶解。
2） CF系列熒光染料是Biotium的注冊商標(biāo)，Alexa Fluor和DyLight系列染料是Thermo Fisher的注冊商標(biāo)，Cy系列染料是Cytiva的注冊商標(biāo)。
3） 本品僅供科研用途，絕不可以用于臨床或診療用途。
4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
以下是用熒光標(biāo)記的rCTB對細(xì)胞進行標(biāo)記的實驗流程。對于其他的應(yīng)用（比如：神經(jīng)示蹤），請根據(jù)應(yīng)用查找相應(yīng)的文獻(xiàn)作為參考。
一、 自行準(zhǔn)備材料
1.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）（比如：MS3552-500ML）
1.2 牛血清白蛋白（BSA）（比如：MP6101-5G）
1.3 HBSS（比如：MS3505-500ML）
1.4 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）
1.5 【可選】Hoehcst 33342（比如：MX4203-10MG，MX4203-1ML，MX4204-10ML）
二、 染料準(zhǔn)備
重溶：將低溫保存的CF647 conjugated- rCTB（規(guī)格：100μg）置于室溫回溫至少30min，低速離心3-5min，將粉末離心至管底。直接往瓶子加入100μl無菌水或1×PBS使其充分溶解，即得到1mg/ml的母液。
保存：新鮮制備的CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）置于+4℃避光保存，3個月穩(wěn)定。亦可根據(jù)單次用量分裝后，置于-20℃避光保存，6個月穩(wěn)定，避免反復(fù)凍融。
三、 活細(xì)胞的表面標(biāo)記
3.1用4℃預(yù)冷的HBSS+0.5% BSA清洗細(xì)胞一次；
3.2用4℃預(yù)冷的HBSS+0.5% BSA稀釋CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）到工作濃度：400ng/ml-1μg/ml。
3.3吸走細(xì)胞內(nèi)的緩沖液，加入新鮮配置的CF647 conjugated- rCTB染色工作液。+4℃避光孵育30min。
3.4用4℃預(yù)冷的HBSS+0.5% BSA清洗細(xì)胞三次；
3.5用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，+4℃避光固定15min。
3.6用PBS清洗細(xì)胞二次，之后進行成像或接著做后續(xù)的染色?！咀ⅲ焊鶕?jù)實驗需求，考慮是否加入核復(fù)染劑-Hoechst 33342等】
相關(guān)產(chǎn)品
名稱 | 規(guī)格 | |
MX0931-1ML | Cholera Toxin Solution (50μg/ml), Cell Culture Test霍亂毒素溶液 | 1ml |
MX0932-500UG | Cholera Toxin from Vibrio Cholerae霍亂毒素 | 500μg |
MX0933-500UG | Cholera Toxin B subunit霍亂毒素B亞基 | 500μg |
MX0934-100UG | 霍亂毒素B亞基（大腸桿菌重組表達(dá)）（溶液） | 100μg |
MX0940-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF488A標(biāo)記，綠色熒光） | 100μg |
MX0941-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF594標(biāo)記，紅色熒光） | 100μg |
MX0942-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF647標(biāo)記，深紅色熒光） | 100μg |
MX0943-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF680R標(biāo)記，近紅外熒光） | 100μg |
MX0944-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF568標(biāo)記，紅色熒光） | 100μg |
MX0945-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF640R標(biāo)記，深紅色熒光） | 100μg |
MS3505-500ML | 1×Hanks平衡yan溶液（含鈣鎂，無酚紅） | 500ml |
MP6101-5G | BSA, Standard Grade牛血清白蛋白（標(biāo)準(zhǔn)級別） | 5g |
附錄I幾款CF染料的光譜特征
CF488A | CF568 | CF594 | CF640R | CF647 | CF680R | |
最大Abs/Em | 490/515 nm | 562/584 nm | 593/614 nm | 642/662 nm | 650/665 nm | 680/701 nm |
摩爾吸光系數(shù) | 70,000 | 100,000 | 115,000 | 105,000 | 240,000 | 140,000 |
分子量 | ~914 | ~714 | ~730 | ~832 | ~836 | ~912 |
激發(fā)激光線 | 488nm | 532 nm or 568 nm | 561 to 568 nm | 633, 635 or 640 nm | 633 or 635 nm | 680 or 685 nm |
可替代染料 | Alexa Fluor 488 Cy2 DyLight 488 FITC | Alexa Fluor 568 ATTO 565 Rhodamine Red | Alexa Fluor594 Texas Red DyLight 594 | Alexa Fluor 647, ATTO 647N, Cy5, DyLight 649 | Alexa Fluor647 Cy5 DyLight 649 | Alexa Fluor680 Cy5.5 DyLight 680 IRDye 680LT |
應(yīng)用 | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細(xì)胞儀 超分辨率成像（STED,TIRF,STORM,SIM, 2-Photon） | 共聚焦顯微鏡 單分子成像 超分辨率成像（SIM, TIRF, STED，STORM） | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細(xì)胞儀 超分辨率成像（STED，2-Photon） | 共聚焦顯微鏡 單分子成像 超分辨率成像（STED，SIM,2-Photon，TIRF,FLImP） | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細(xì)胞儀 超分辨率成像（STORM） | 小動物成像儀 超分辨率成像（STORM、3D） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
