Annexin V-AF647染色液用于鑒定凋亡和壞死細(xì)胞。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰PS有高度親和力，可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合，將Annexin V標(biāo)記熒光染料AF647利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡。
Annexin V搭配碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或7-AAD等DNA染色液使用，可區(qū)分處于不同凋亡時期的細(xì)胞。
本試劑搭配PI檢測誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：

實(shí)驗(yàn)操作指南步驟：

1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300g離心5min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
   注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時，可能會因?yàn)橄忍幚韺?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。

2. 取1-5×10^5重懸的細(xì)胞，300g離心5min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。

3. 細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-AF647染色液和5μL的細(xì)胞核DNA染色液。

4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15-20min。

5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內(nèi)完成檢測。

保存條件：
4℃可保存1年；Annexin V-AF647染色液需要避光保存。

注意事項(xiàng)：

1. 為獲得的使用效果，請?jiān)?-6個月內(nèi)使用，Annexin V-AF647禁止冷凍保存；

2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加；

3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，操作和存放過程盡量注意避光保存；
   

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5. 
   

(本試劑產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療)