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上海莼試生物技術有限公司
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人脈絡膜血管內皮細胞培養操作
2022-12-20 閱讀(109)
人脈絡膜血管內皮細胞培養操作:
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml yi酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）250g用于樣品稀釋。（WS）
卵黃瓊脂培養基基礎250g加入卵黃，用于厭氧梭狀芽孢桿菌的分離培養
庖肉牛肉粒100g加入庖肉培養基基礎(027140)，用于厭氧菌的增菌培養和保存，還用于厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗
庖肉培養基基礎250g加入皰肉牛肉粒(027150)，用于厭氧菌的增菌培養和保存，還用于厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗。
麥芽浸膏湯250g用于酸性罐頭食品商業無菌檢驗
錳鹽營養瓊脂250g用于嗜溫和嗜熱需氧芽孢桿菌的檢測
酸性肉湯250g用于酸性罐頭食品商業無菌檢驗
溴甲酚紫葡萄糖肉湯250g用于低酸性罐頭食品商業無菌檢驗
血平板 (成品培養基)20個/盒用于營養要求較高的細菌的培養及溶血試驗
哥倫比亞血平板(成品培養基)20個/盒用于一般病原菌的分離培養和溶血性細菌的鑒別
改良克氏雙糖培養基250g用于小腸結腸炎耶爾森氏菌的鑒定
硝酸鹽蛋白胨水培養基250g用于鑒別綠膿桿菌分解硝酸鹽產氣試驗
半固體瓊脂250g供細菌動力觀察、菌種保存，H抗原位相變異試驗等。(美國FDA、SN、GB)
3%氯化鈉三糖鐵瓊脂250g用于副溶血性弧菌的生化反應。(GB、SN)
血瓊脂培養基基礎250g加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養基，用于營養要求較高的細菌的培養及溶血試驗
葡萄糖銨培養基100g
尿素瓊脂培養基基礎250g用于鑒別腸道菌尿素酶試驗
緩沖動力-硝酸鹽培養基250g供產氣莢膜梭菌動力和硝酸鹽還原測定用
