中文名稱：定點(diǎn)突變?cè)噭┖?/strong>
英文名稱：HiperMut Site-Directed Mutagenesis Kit
產(chǎn)品規(guī)格：10T
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164554
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。產(chǎn)品介紹：
本試劑盒是基于HiperClone快速克隆技術(shù)的定點(diǎn)突變系統(tǒng)。使用本試劑盒，目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DpnI消化、HiperClone重組環(huán)化后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化即可完成定點(diǎn)突變。 本試劑盒由兩個(gè)模塊組成：Hiper II Pfu DNA聚合酶擴(kuò)增模塊和HiperClone快速克隆模塊。Hiper II Pfu DNA聚合酶高的保真度顯著降低了擴(kuò)增過程中引入新突變的可能性，其的長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，廣泛適用于長(zhǎng)度小于20kb的任何質(zhì)粒擴(kuò)增。HiperClone快速克隆系統(tǒng)用高效的同源重組反應(yīng)替代傳統(tǒng)的退火成環(huán)反應(yīng)。因此使用HiperMut定點(diǎn)突變?cè)噭┖?/strong>進(jìn)行DNA定點(diǎn)突變時(shí)，引物設(shè)計(jì)更加靈活，且擴(kuò)增反應(yīng)不再需要以線性方式進(jìn)行，極大減少了模板使用量，有于原始甲基化模板的*降解。HiperClone技術(shù)可以高效完成兩個(gè)PCR產(chǎn)物的無縫拼接，因此該試劑盒還能以單次擴(kuò)增的方式對(duì)目標(biāo)質(zhì)粒上不連續(xù)的兩個(gè)位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行突變。 本試劑盒中的重組酶Exnase經(jīng)過優(yōu)化，專門針對(duì)單堿基、不連續(xù)雙堿基定點(diǎn)突變。此外，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異，其DpnI消化產(chǎn)物可不進(jìn)行DNA純化而直接用于重組反應(yīng)。高度優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、快捷的操作流程以及*的成功率，使得本試劑盒成為DNA定點(diǎn)突變選產(chǎn)品。 保存：-20℃，有效期1年。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
PH4-5顯色（BROMOCRESOL GREEN）指示溶液
PH5-6顯色（CHLOROPHENOL RED）指示溶液
PH6-7顯色（BROMOTHYMOL BLUE）指示溶液
PH7-8顯色（PHENOL RED）指示溶液
PH8-9顯色（THYMOL BLUE）指示溶液
小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)elisa ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit
大鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratnicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 96T/48T
人氧化酶(DAO)免疫試劑盒 Human diamine oxidase,DAO ELISA Kit
Ratmalondialchehyche,MDAELISAKit大鼠二(MDA)elisa規(guī)格：96T/48T
DHPR受體蛋白表達(dá)檢測(cè)試劑盒20次
Mousepara-aminobenzoicacid,PABAelisa小鼠對(duì)(PABA)elisa規(guī)格：96T/48T
定點(diǎn)突變?cè)噭┖?/strong>豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)elisa分析檢測(cè)試劑盒
豚鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)elisa檢測(cè)試劑盒
豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)elisa分析檢測(cè)試劑盒
