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禽白血病抗體酶聯免疫分析試劑盒實驗原理

2018年06月05日 14:02:49人氣:530來源:上海谷研實業有限公司

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關 鍵 詞禽白血病抗體酶聯免疫分析試劑盒,elisa試劑盒
【資料簡介】

禽白血病抗體酶聯免疫分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中禽白血病抗體表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中禽白血病抗體相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中禽白血病抗體的存在與否。
標本要求 
.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色0分鐘.
0.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
禽白血病抗體酶聯免疫分析試劑盒計算和結果判定:
  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥.00; 陰性對照平均值≤0.0
  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.5
  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為禽白血病抗體陰性
  陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為禽白血病抗體陽性
。 
注意事項
.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
禽白血病抗體酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期
.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個

 

上海谷研實業有限公司作者

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