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免疫組化非特異性染色及控制方法

2010年12月23日 11:07:58人氣:1013來源:上海逸峰生物科技有限公司

一、非特異性染色的識別

常出現在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應產物點、團或塊狀。

二、非特異性染色的原因

1. Ig與Fc受體結合

多見于冰凍切片(特別是淋巴造血組織,淋巴細胞,單核細胞,組織細胞表面多),主要是和二抗反應,因為一抗一般稀釋度均較大,因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體,所以石蠟切片不多見。

避免方法

(1)用以二抗相同種族的正常血清封閉切片;

(2)用不含Fc段的抗體,但價格貴。(V區,C1區不含Fc段,用Pepsin消化)

2. 靜電吸附

抗體是一種帶負電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結合,如膠原纖維。

避免方法

(1)盡量稀釋一抗;

(2)降低抗體的電荷,如用2.5%NaCl,0.05mTBS代替PBS;

(3)用去垢劑如triton-100,Tween-20等處理切片。

3. 二抗與組織中的Ig結合

如羊抗兔的二抗,二抗可以標本中(人)Ig發生交叉反應,科學上越接近的動物,交叉反應越明顯,如人與猴,兔與豚鼠。

避免方法:用與待測組織相同的5%的正常血清稀釋二抗。如人血清。

4. 組織中殘存醛基與Ig的結合

如醛類固定后未能*的沖洗,殘留醛基可以和Ig結合。

避免方法

(1)*沖洗;

(2)0.02%的新鮮的硼氧化鉀液處理10分鐘后沖洗。

5. 內源性過氧化物酶

紅細胞,粒細胞的含量尤其高,鏡下可以識別,不要將其當成陽性結果。

避免方法

(1)石蠟切片 0.3%雙氧水-甲醇溶液處理切片;

(2)冰凍切片 3%雙氧水處理切片5分鐘(99:1)因為未經固定包埋,大部分酶未被破壞;

(3)對于骨髓涂片 用非過氧化物酶標記的抗體

6. 內源性*

以 24mg/ml的卵白素封片15分鐘。

7. 交叉反應

PcAb敏感性高,但特異性稍低,容易出現非特異性染色。

避免方法

(1)盡可能稀釋抗體;

(2)盡可能用McAb。

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