樣品操作及分析

以下方案僅提供指導(dǎo)，實際情況應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物檢測胱天蛋白酶的常規(guī)方案

1.在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。

2.如下準備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。

4.使用熒光酶標儀監(jiān)測熒光，或使用酶標儀監(jiān)測吸光度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針檢測細胞Caspase的方案

1.在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細胞至少1小時。

5.用HHBS清洗細胞至少一次。

6.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 µL至500 µL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。

4.用HHBS清洗細胞至少一次。

5.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。