Caspase是一組天冬氨酸（FMOC-L-天冬氨酸）特異的半*蛋白酶，它們在凋亡中發(fā)揮重要作用。一般來說，哺乳動物的caspase可根據(jù)功能分類：細胞因子激活（包括caspases 1、4、5、13）；凋亡起始（包括caspases 2、8、9、10）和凋亡執(zhí)行（包括caspases 3、6、7）。 市場上有很多caspase檢測試劑盒，來檢測多種caspase的活性。我們既可以通過熒光標記的底物來檢測有活性的caspase，也可以利用熒光標記的caspase抑制劑來標記。你還可以通過免疫組化分析來檢測切割的底物如PARP。當然，很多公司也有caspase的抗體，但操作流程長，也不能對活細胞進行成像。
為此，Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent，以檢測凋亡時的Caspase 3/7活性。這是一種四個氨基酸（L-初油氨基酸）的肽段（DEVD），帶有核酸結合染料。大家都知道，DEVD肽段是Caspase 3/7的底物。CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent本身不發(fā)熒光，因為DEVD肽段抑制了染料與DNA的結合。然而，當?shù)蛲黾毎械腃aspase-3⁄7激活后，DEVD肽段被切割，讓染料與DNA結合，并發(fā)出明亮的綠色熒光。染料與DNA結合后的發(fā)射波長為~530 nm，可利用標準的FITC濾光片觀察。
與其他方法相比，這種試劑的檢測要簡單得多。只需將經(jīng)過稀釋的檢測試劑加入細胞，孵育30分鐘，即可觀察。Caspase-3⁄7激活的凋亡細胞將有著明亮的綠色細胞核，而未激活細胞的熒光信號極低。這種分析實現(xiàn)了活細胞內(nèi)Caspase-3⁄7激活的觀察。此外，由于檢測中無需洗滌步驟，故避免了洗滌所造成的細胞損失。更重要的是，CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent的信號可耐受固定和透化。這允許了后續(xù)開展終點分析，或利用免疫細胞化學檢測其他目的蛋白。此試劑適用于成像、高內(nèi)涵分析/篩選、高通量篩選和流式細胞儀。
傳統(tǒng)的凋亡研究大多是在單個時間點進行測定，然而，因為細胞是活體，其生物學和細胞進程是動態(tài)而非靜態(tài)的，故記錄細胞應答某些刺激（如藥物處理或某種生長因子刺激）時所產(chǎn)生的動態(tài)變化可能更為關鍵。羅氏應用科學部推出的xCELLigence系統(tǒng)則為凋亡通路的全盤觀察打開了大門，讓我們能夠更深入地了解細胞中究竟發(fā)生了什么。xCELLigence是一種無需標記、同時又可對細胞進行實時監(jiān)測的新型細胞分析平臺。它利用檢測電子傳感器阻抗變化以反映細胞生理狀態(tài)，從而對細胞進行無損傷地實時定量檢測。細胞接種在96微孔E-plate中，在每個孔的底部有嵌入的微電子感應器。使用低電壓（20mV）交流電在孔內(nèi)產(chǎn)生一個離子環(huán)境，就能反映出細胞增殖、存活、凋亡、形態(tài)變化等細胞生物學狀態(tài)。
人elisa試劑盒
