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大鼠促黃體激素,大鼠促黃體激素elisa試劑盒實驗原理和操作步驟

閱讀:981發(fā)布時間:2012-06-08

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大鼠促黃體激素elisa試劑盒實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本大鼠促黃體激素(LH)水平。用純化的大鼠促黃體激素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促黃體激素(LH)再與HRP標記的促黃體激素(LH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體激素(LH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠促黃體激素(LH)濃度。

 

 

大鼠促黃體激素elisa試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20ng/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10ng/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5ng/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5ng/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。


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