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極威生物為你介紹間接法成功的關鍵

閱讀:306發(fā)布時間:2017-12-18

  間接法成功的關鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應的雜質,例如以  E.Coli  為工程酶的重組抗原,如其中含有 E.Coli  成份,很可能與受過 E.Coli 感染者血甭中的抗 E.Coli  抗體發(fā)生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人 Ig  反應的物質,例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的 Ig去除,試驗中也發(fā)生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果。

  間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性  IgG  只占總 IgG  中的一小部分。IgG  的吸附性很強,非特異 IgG  可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被后一般用無關蛋白質(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外,在檢測過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 


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