大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按慣例方法收集,應留意防止溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標本可能會添加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有菌體污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP。也會發(fā)生假陽性反應。

一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4°C。超越一周測定的需20C保存。凍住血清融解后,蛋白質局部濃縮,散布不均,應充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾,弄清后再檢測。重復凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應留意無菌操作,也可參加適當防腐劑。

ELISA試劑盒檢測血清的詳細留意事項:

1)要留意防止呈現(xiàn)嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應顯色。

2)冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應留意,不要進行劇烈振蕩,重復倒置混勻即可。

3)標本在保存中如呈現(xiàn)細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應離心沉積后取上清檢測。

4)樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染，一則菌體的成長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果；二則-些菌體的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β半乳糖苷酶本身會對用相應酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。

5)血清標本如是以無菌操作別離，則可以在2~8°C下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應在-70°C以下。

以上是詳解血清ELISA檢測的注意事項，希望可以幫助到大家。